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    3. 技術文章

      人富含 NK 活性大顆粒**細胞(LGL)的純化試劑盒實驗方法

      人富含 NK 活性大顆粒**細胞(LGL)的純化試劑盒實驗方法

       

      【產品規格】

       100ml/Kit

       【產品組成】

       為方便廣大用戶使用,試劑內容如下:

      名稱

      產品編號

      規格

       A

       密度梯度分離液原液

       NK2011H-A

       100ml





       B

       梯度制備稀釋液

       NK2011H-B

       100ml





       C

       說明書

       

       1份






      【實驗前準備】 

       

      適用儀器:*大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機

       

      【檢驗方法】

       

      全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。

       

      1. 收集從外周血中分離的單個核細胞(人全血單個核細胞分離液,產品貨號;LDS1075): 1×108 個懸于 1ml 無血清培養基中。

      2. 梯度分離溶液制備,使用使用梯度制備稀釋液參考下表將原液稀釋至所需濃度:







       原液濃度(%)

      83% 

       79%

       73%

       70%

       66%







       比重(g/ml)

       1.067

       1.064

       1.061

       1.058

       1.056

       

      3. 梯度分離層的制備:將梯度分離液由高密度至低密度逐層加入至 10ml 離心管(試管)內,每層約 1.2-1.5ml 加入后應可見明顯的梯度界面,同時標記 70%層上部界面及 73% 底部界面位置。

       4. 上樣:將單個核細胞單細胞懸液 1ml 加至梯度界面上。

       5. 離心:400g,離心 20-25min。

       6. 取樣:吸取 73% 70%溶液界面及上下兩層分離溶液(即步驟標記位置之間的溶液),

       

      細胞經洗滌后供后續試驗。

       

      注:樣本量加大時請客戶按選取對應耗材且按比例增加試劑用量,但應注意加入試劑及樣本

       

      后總體積不超過離心管總體積的 2/3。

       

      【注意事項】

       

      1. 實驗全過程需在 20℃±2℃下進行,否則影響離心效果。

       

      2. 由于多層分離溶液之間密度差別不大,因此離心機加速、降速時要慢,要平穩。

      3. 試劑瓶蓋需蓋緊,防止蒸發和污染。

      【儲存條件及有效期】常溫保存,有效期年。本品易感染**,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。

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