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    3. 技術文章

      FICOLL PLUS 不連續密度梯度分離液使用說明

      FICOLL PLUS 不連續密度梯度分離液使用說明

      技術文檔編號:TBD0054SOP

      ICLL PLUS不連續密度梯度分離液與梯度制備稀釋液配比稀釋后,可形成不同濃度(密度)梯度分離液,經低速(200-1000g)離心于數分至數十分鐘內可達到滿意的細胞分離效果。FICOLL PLUS 不連續密度梯度分離液不穿透細胞,無毒害,成功的用于動物細胞的分離。

      試劑組成

      名稱:FICOLL PLUS 密度梯度原液 貨號:P1114  100ml  梯度制備稀釋液 100ml

      【簡介】

      FICOLL PLUS 不連續密度梯度分離液與梯度制備稀釋液配比稀釋后,可形成不同濃度(密度)梯度分離液,經低速(200-1000g)離心于數分至數十分鐘內可達到滿意的細胞分離效果。FICOLL PLUS 不連續密度梯度分離液不穿透細胞,無毒害,成功的用于動物細胞的分離。

      【操作方法】

      • 不同濃度(密度)分離溶液的制備,使用梯度制備稀釋液參考下表將原液稀釋至所需濃度:

      原液濃度(%

      80

      67

      56

      45

      32

      20

      比重(g/ml

      1.090

      1.077

      1.067

      1.056

      1.043

      1.031

      • 梯度分離層的制備:將梯度分離液由高密度至低密度逐層加入至離心管內,加入后應可見明顯的梯度界面。
      • 上樣:根據不同目的細胞,加入不同體積血液樣品或單細胞懸液(樣本體積及細胞濃度不宜過高,否則影響細胞的分離及回收)。
      • 離心:400-600g 離心 20-30min。根據不同樣本個體差異及目的細胞特點,用戶可適當調節離心力及離心時間(離心力*大不超過 1000g)。
      • 取樣:當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時,可逐層去除分離溶液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于分離液層中,則需要逐層收集。收獲含有分離液的細胞經 2 次洗滌后可供培養或檢測用。

      【注意事項】

      • 實驗全過程需在 20±2℃下進行,否則影響離心效果。
      • 由于多層分離溶液之間密度差別不大,因此離心機加速、降速時要慢,要平穩。
      • 試劑瓶蓋需蓋緊,防止蒸發和污染。

      【儲存條件及有效期】常溫保存,有效期 2 年。本品易感染**,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現白色結晶,影響分離效果。

      【特殊細胞分離試劑盒舉例】

      1. 富含 NK 活性大顆粒**細胞(LGL)的純化試劑盒(產品貨號:NK2011H

      • **母細胞純化和死細胞去除試劑盒(產品貨號:P1114B
      • 【人不同血細胞的漂浮密度】

      細胞

      漂浮密度

      細胞

      漂浮密度

      紅細胞

      1.090-1.110

      **細胞

      1.052-1.077

      粒細胞


      **細胞

      1.062-1.075

      嗜酸性

      1.090-1.095

      **細胞

      1.065-1.077

      嗜中性

      1.080-1.085

      **母細胞

      1.065-1.077

      單核細胞

      1.050-1.066

      自然殺傷細胞

      1.050-1.070

      血小板

      1.030-1.060



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